168 发表于 2009-9-10 10:46

有前辈知道怎么从病毒到DNA的吗?

我拿到的病毒,想知道里面包裹的DNA是不是我想要的,怎么办?因为病毒都是用来转染细胞的,不可以直接用来感染细菌吧!
我已经试过把病毒感染细胞,然后提取mRNA然后RT得到cDNA然后PCR,但是没有我想要的带。所以不知道怎么办好了,有高人可以指点一下吗?多谢啦!

gagaleonwoo 发表于 2009-9-11 14:19

本帖最后由 gagaleonwoo 于 2009-9-11 15:21 编辑

说实话,这个问题我也觉得很新鲜。楼主不妨找一个正对照,先确定一下你转染的基因确实表达。另外,楼主转染的基因没有任何的tag吗?不妨检测一下tag,或者直接WB检测蛋白是否正确表达。

168 发表于 2009-9-11 17:41

多谢楼上.我做了多个病毒,去年的时候,所用tag都是Flag,大小都一样,其实是两种蛋白的杂合体,两种蛋白是同一族的,有些许差别,其中一个对cAMP有反应,另外一种没有,想确定respons domain所以才做了chimera,不知道表达清楚了没有,请高手帮忙!!多谢!
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