这里有多少发nature、science的？

pauliang · 发表于 2010-3-30 18:46

呵呵，多谢！

matthiasB · 发表于 2010-3-30 20:02

i am not specialized in ion channel or electrophisiology, but unfortunately i need to analyze some patch clamp results, which I can not really understand. For example, when 2 uM quinidine was applied to the hERG transfected HEK293 cells (whole cell model), the resting potential increased dramatically even without additional pulse activation?

i am at home and can not type in chinese..

pauliang · 发表于 2010-3-30 20:25

几个问题不明白：
1. Quinidine不是钾通道阻滞剂，其主要作用是阻断快Na通道，当然也可以阻断IKr，IKs等等。不是很明白为什么你们要给一个稳定转染HERG的细胞系用Quinidine？
2. 你们是做的Pacth，而且是全细胞模式记录的HEK293的电流，你是如何看到细胞的静息电位的？你是不是把Holding Potential和Resting Potential弄混了？

方便的话你可以把数据发给我，我抽空可以帮你分析一下（如果不是很多）。

matthiasB · 发表于 2010-3-30 20:36

I did not do the experiment. I do not really know what they did. They are physicist......But i am sure what i meant was resting potential instead of holding potential coz they fixed the current and measure the voltage.............Qunidine is also a hERG blocker. We used it here just as positive control.

matthiasB · 发表于 2010-3-30 20:53

我还是用input打中文吧。我作的不是常规的那个tail current recording.我们就是纯粹的测一个跨模电压。所以没有任何外加的电压pulse.我不能理解的是，既然连没外加电压那离子门就没inactivation or activation.但是尽管如此为杀那个resting potential 电压还会变呢

matthiasB · 发表于 2010-3-30 21:00

我们家当家的foxtail ta 老公发过nature de.haha

pauliang · 发表于 2010-3-30 21:13

Patch可以分两种：一种是钳住电压记录电流，一种是钳住电流记电压的变化。你们的就是后一种。就是说看在不同的电流下的电压大小。
因为当你给了一个电流时，细胞膜的电压就会有相应的变化的。
不知道这样说你明白了吗？
不过我还是不理解，为什么要用奎尼丁去阻断Iks。因为它毕竟不是特异性的钾通道阻断剂。

pauliang · 发表于 2010-3-30 21:19

http://en.wikipedia.org/wiki/Electrophysiology
希望这个链接能够帮到你，看完以后要是还有不明白的可以发消息给我。

matthiasB · 发表于 2010-3-30 21:22

quinidin我随口说的。。任何blocker都一样.只要是applied to the hERG transfected HEK293 resting potential都上升applied to the wild type HEK293 resting potential 都保持不变...........wei sha

pauliang · 发表于 2010-3-30 21:26

你是说静息电位从比如-80上升到-60？这个我认为很好解释啊，因为你把钾通道阻滞了，所以在表达HERG的293细胞上静息电位会上升。而Wild type（如果这里wild type你是指没有转染的293细胞的话）的293细胞表面是几乎没有钾离子通道表达的，所以静息电位也就几乎不变。

iceboyer · 发表于 2010-3-30 21:27

完全不懂你们讨论的内容呵呵

不过从物理化学的角度，苯环是可以导电的，而且环状结构也会产生磁场。

pauliang · 发表于 2010-3-30 21:29

电生理其实不难，但如果没有学过的话就会觉得很难。我记得我刚开始做硕士课题的时候，觉得天啊这帮畜生都会这么多，是人吗？

matthiasB · 发表于 2010-3-30 21:36

本帖最后由 matthiasB 于 2010-3-30 21:44 编辑

我电生理10年前大学时候学的。完全还给老师了。。。但是我就是每想通是你如果没有外加电压没有除及复极，离子门根本就是静息的，哪能hui bei block ne.........

iceboyer · 发表于 2010-3-30 21:44

生物类的科研好复杂啊，
幸好我老当年没读生物系。

matthiasB · 发表于 2010-3-30 21:46

侬读的啥

pauliang · 发表于 2010-3-30 21:55

你怎么患迷糊了呢？细胞的静息电位是怎么产生的呢？当细胞的入胞电流和出胞电流平衡时，这个电位就是静息电位啊。又不是说静息电位时所有的离子通道都是静息的。

matthiasB · 发表于 2010-3-30 22:06

你顺便把godman-equation用我能理解的方式解释一下把。。。。。。

neuron · 发表于 2010-3-30 22:15

回复 35# matthiasB
我理解你做的是全细胞记录下的电流钳
一般heterologous expression system中，转染的离子通道的表达要远远多于背景其他通道的表达。
在转染的HEK细胞中，KCNH钾离子通道决定了静息电位。（大概就像在神经元里一样）
一般细胞都是胞内钾离子浓度高于胞外
block钾离子外流，就能够是细胞极化
就像在neuron里一样，打开钠离子通道或者阻滞背景钾离子外流都可以去极化神经元

（不好意思，很久没用中文写这些东西了，语句可能不大通顺，见谅）

pauliang · 发表于 2010-3-30 22:15

Goldman Equation的最简单解释就是计算细胞膜上没有离子的进出时的膜电位（准确的说是出膜的电流和入膜的电流相平衡），也就是我们通常所说的静息电位。

pauliang · 发表于 2010-3-30 22:18

其实对这个公式，不需要去详细理解太多。
http://www.nernstgoldman.physiology.arizona.edu/
这个网页可以帮你计算静息电位或者反转电位。

pauliang · 发表于 2010-3-30 22:23

你可以去看看，你随便把胞内或者胞外的钾离子浓度改变一下，静息电位都会相应的变化的。

pauliang · 发表于 2010-3-30 22:26

回复 matthiasB
我理解你做的是全细胞记录下的电流钳
一般heterologous expression system中，转染的离 ...
neuron 发表于 2010-3-30 22:15

还是你的表达能力比我好啊。
理论上基本就是这样的，而且在HEK 293细胞膜上是几乎没有什么离子通道的。所以说表达的HERG通道是绝对占优势的离子通道。

pauliang · 发表于 2010-3-30 22:33

说这个blocker妖呢是因为他是个complex （A+B), (A+B)一起呢会阻断那个通道，那个b呢从结构上有苯环环看着就 ...
matthiasB 发表于 2010-3-30 18:25

你是不是在做新药研发啊？
你们的假设不是说不可以，但为什么会认为直接加在电极内液里就会被细胞摄取呢？说不定这个阻断剂是一个竞争性的阻断剂，你前面的A只是个催化剂之类的，和A在一起时B的活性会增加100倍呢。

matthiasB · 发表于 2010-3-30 22:34

我明天上班后能直接打中文了再来请教你们吧。。我还在纠解。用inputking太不方便了

pauliang · 发表于 2010-3-30 22:35

以奎尼丁举例，其阻断效应和心率有显著依赖关系的。心率越快其阻断效果越好。具体的机制忘记了。
总之，关于阻断剂的阻断机制很复杂，有时候真是说不清楚。

neuron · 发表于 2010-3-30 22:37

回复 52# pauliang

HEK 的背景通道还是很多的。。。很不幸。。。
好在HEK在表达外源蛋白质的能力很强。。。

pauliang · 发表于 2010-3-30 22:41

请教楼上，HEK的内源性膜上钾离子通道很多吗？这个我还真是不知道。

neuron · 发表于 2010-3-30 22:43

回复 28# matthiasB

会不是是open channel blocker？
有的离子通道阻断剂只能在离子通道开放的情况下阻断的
你可以先activate这个离子通道
然后apply blocker（s）

neuron · 发表于 2010-3-30 22:50

回复 57# pauliang
你可以上pubmed看
不仅钾离子通道
proton channel， TRP channel。。。
你想呵，HEK是肾源性的细胞
肾。。。离子通道能少得了么。。。。。。

matthiasB · 发表于 2010-3-30 22:51

NEURON同学的思路很清晰的表达能力也强。你来帮我分析分析哦。测量下来的数据是表达erg通道的hek细胞resting potential 在-70mV,不表达的普通的HEK resting potential在-10mV。到这里为止我都能明白因为在普通的HEK细胞里chloride conductivity predominate the resting potential. In the erg stably transfected HEK cells, the potasium conductivity predominate the resting potential.就如你们上面说的。但是我现在纠解的是在如果我把一个erg BLOCKER 加到 hERG-HEk, 那个resting potential 从-70除及到-20mV，，

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