回复 60# matthiasB
谢谢
如果HEK表达钾离子通道，那么钾离子的reversal potential dominates the membrane, which is -70mV
如果不表达钾离子通道，那么HEK的静息电位在－20mv左右（至少我钳的是这个）
如果阻断钾离子通道，那么膜电位就不再由钾离子决定。这时候的transfected细胞，大致和non－transfected细胞一样，Vm 也许会到－20mV。当然前提是，钾离子通道的表达不会影响到HEK内源通道的表达。如果影响到，那么阻断了ERG的HEK和control也不一样。
本帖最后由 matthiasB 于 2010-3-30 23:15 编辑
但是你说那个最常规的hERG PULSE PROTOCOL吧。你一般都是从-80，去及到-50测个leak current,然后从-50在去及到40mV clamp 2 seconds,打开内门关闭外门。然后从40复及到-50,快速打开外门，慢速关闭内门，这个过程中peak tail current出现。所以 我不知道为什么总能是觉得那个ERG只有在有除及或者复及出现的时候2扇门才会开启关闭才有可能被blocker...这个想法是比较怪，但是不知道为什么我总在纠解这个。
楼上正解。
回复 62# matthiasB
KCNH不是6transmembrane domains + 1pore
你说的 内门 外门是指的什么？
大家都喜欢用two-gate model来解释我也跟着起哄
http://www.hergchannel.com/
你说的是structure
回复matthiasB
KCNH不是6transmembrane domains + 1pore
你说的 内门 外门是指的什么？
neuron 发表于 2010-3-30 23:22 http://www.dolc.de/forum/images/common/back.gif
回复 65# matthiasB
我明白了
你是不是觉得blocker不能起作用，除非inactivation 或者 activation gate同时打开？
但是如果你注意到，表达erg的HEK，静息电位比control要低。就说明，ERG对静息电位是有贡献的。也就是说在生理条件下，是有erg通道开放的。也许只是一小部分，但是已经足够改变膜电位了。
那个动画很好，但是也有些误导。比如两个门控结构，一个守着离子通道的门，一个手着离子通道的出口。很容易使人联想到，如果两个不同时打开，blocker 能bind谁，怎么能阻滞呢？ 一种可能是这两个门控结构其实是在某个跨膜domain，而不是守着pore的内外表面。 我之前提到过，open channel blocker,这种阻滞剂只能卡在已经打开的pore中间。所以如果离子通道不打开，这种blocker不起作用的。
我猜想在生理条件下，部分ERG是开放的。所以加入blocker，这部分开放的ERG被关闭了，导致了膜的去极化。如果在去极化的过程中，blocker可以被remove。就像NMDA receptor对待Mg2+那样。那么activation gate被迅速打开，部分inactivation gate打开，进一步导致了钾离子的外流，进一步加快了膜的去极化。如果去极化不能remove channel blocker,那么就单纯关闭背景ERG也是足够膜去极化的。
我是做离子通道的。对各种离子通道都很感兴趣。有机会我们再慢慢讨论。今晚就只能回帖到这里了。
晚安
回复 66# neuron
在楼主的实验条件下，erg应该是开放了的，至少是部分开放了的（因为和WT的HEK293细胞相比，表达erg的细胞的静息电位从-20变到了-80左右，而-80刚好是钾离子通道的静息电位）。
这种情况下，加入阻断剂后的静息电位的改变就如Neuron所说，不论阻断效应是否被移除，都会有一个细胞的相对去极化过程。
顺便问一下，Neuron你是具体做什么通道的啊？不出意料，应该是神经方面的喽。
我是做心律失常这方面，希望以后可以互相讨论讨论。
谢谢大家
我觉得你语言表达能力真的很强。被你这么一说觉得很有道理。确实这样transfected HEK细胞静息电位比正常hek低很多应该可以indicate在静息状态下部分erg还是起作用的。回复matthiasB
我明白了
你是不是觉得blocker不能起作用，除非inactivation 或者 activation gate同时 ...
neuron 发表于 2010-3-30 23:55 http://www.dolc.de/forum/images/common/back.gif